数字扫描激光薄片荧光显微镜(DSLM)中的共焦检测已经被确立为改善图像质量的金标准方法。滚动快门工作模式下，CMOS相机的选择性线检测可以抑制失焦和散射光，从而减少图像形成过程中的背景信号。大多数现代CMOS有两个滚动快门，但通常只使用一个照明光束，使最大可获得的帧速率减半。我们报道了使用声光偏转器实现双共焦DSLM恢复全图像采集速率的能力。这样一个简单的解决方案使我们能够独立生成、控制并同步相机上的两个滚动狭缝上的两束光。我们证明，成像速度的加倍并不影响共焦探测的高对比度。

总之，我们实现了一种基于AOD的双高斯束激发系统，能够进行单虚拟狭缝共焦LSFM和双虚拟狭缝共焦LSFM。AOD允许无惯性的MHz扫描速率，并生成具有独立空间和振幅控制的多层图像，这些图像可以轻松与任何单滚动快门或双滚动快门读出模式的sCMOS相机同步。我们已经证明，在成像速度方面，双共焦检测模式相比传统共焦LSFM提高了两倍，而不会对对比度产生负面影响，至少在背景水平较低的样本如光学透明组织或斑马鱼幼体中是如此。由于AOD在这里表现得像一个反射镜，但扫描角度更小，我们的方法适用于放大率和分辨率更高、FOV等于或小于我们的物镜。只要通过选择合适的扫描透镜和管透镜以及输入光束尺寸来获得所需的光片腰宽，即使使用更大的视场物镜也能正常工作。通过减弱条纹伪影，可以进一步提高图像质量，这需要增加双面照明、光束旋转系统21或切换到贝塞尔光束照明，即在AOD之后引入两个合适的轴向器或空间光调制器。我们的方法或在高通量成像大组织体积和高时间分辨率的活体生物研究中证明是有用的。

点击查看详细资料

点击查看相关产品